Please use this identifier to cite or link to this item: https://ir.sc.mahidol.ac.th/handle/123456789/485
Title: Detection of infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus (IHHNV) in Penaeus monodon by in-situ hybridization at transmission electron microscopic level
Authors: Boonsirm Withyachumnarnkul
Keywords: IHHNV;in-situ hybridization for TEM;Penaeus monodon;virus tracking;ขบวนการเคลื่อนตัวของไวรัสในเซลล์กุ้ง
Issue Date: 2013
Publisher: Rangsit University
Citation: Rangsit Journal of Arts and Sciences 2013;3(2):121-128.
Abstract: In-situ hybridization procedure was developed to detect infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus (IHHNV) of infected juvenile Penaeus monodon at the ultrastructural level. The tissues were fixed, dehydrated, and embedded in UnicrylTM hydrophilic resin. A 692 bp IHHNV-specific DNA probe, labeled with DIG-11-dUTP, was tested on both semi-thin and ultra-thin sections, and the sections were examined under light and transmission-electron microscopes, respectively. The hybridized probe was detected by means of an anti-DIG antibody conjugated to 10 nm gold particles, followed by silver enhancement. This technique allows IHHNV to be tracked in the infected cell, from entry into the cytoplasm, nuclear penetration, through replication in the nucleus, and release from the cell by exocytosis. This report is the first description of in-situ hybridization to detect IHHNV at the ultrastructural level. The result showed positive in situ hybridization of IHHNV-infected shrimp tissue at TEM in nucleolus and cytoplasm.
Other Abstract: วิธี in situhybridization ถูกพัฒนาขึ้นมาเพื่อใช้ตรวจหาเชื้อ infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus (IHHNV) ในกุ้งกุงลาดำระยะวัยรุ่น ระดับอิเล็กตรอนไมโครสโคป จากตัวอย่างกุ้ง ที่ติดเชื้อไวรัส IHHN เริ่มโดยนำเนื้อเยื่อมา fix ด้วย fixative และตามด้วยขบวนการดึงน้ำออกจากเซลล์เนื้อเยื่อและกำซาบเนื้อเยื่อนั้นด้วยเรซินยูนิคริลเข้าไปในเซลล์ จากนั้นก็เตรียม 692 bp IHHNV DNA probe ซึ่งมี DIG-11-dUTP ติดอยู่นำ probe นี้ไปตรวจการเชื้อ IHHNV ในตัวอย่างชิ้นเนื้อที่ตัดแบบ semi-thin section แล้วส่องดูด้วยกล้องจุลทรรศน์ และตัดแบบ ultra-thin sectionแล้ว ส่องดูด้วยกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนไมโครสโคป Hybridized probe นี้จะจับกับ แอนตี้บอดี้สำหรับ DIG ที่ติดอยู่กับเม็ดทองที่มีขนาด 10 nm จากนั้น ก็จะเสริมการมองเห็นเม็ดทองให้ชัดขึ้นด้วยสังกะสีแล้วส่องดูด้วยกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน เทคนิคนี้จะใช้สำหรับดูขบวนการของไวรัส IHHNVใน การเข้าสู่เซลล์กุ้ง โดยดูการเคลื่อนตัวของไวรัสนี้ผ่านเข้า cytoplasm กุ้ง จนกระทั่งเข้าไปในนิวเคลียส แล้วเริ่มมีการจำลองตัวเองและเพิ่มจำนวนไวรัส ในนิวเคลียสกุ้ง แล้วเคลื่อนตัวออกมาใน cytoplasm ของเซลล์กุ้ง วิธีการ in situhybridizationด้วย TEM นี้เพิ่งใช้ในการตรวจหาขบวนการเข้าเซลล์กุ้ง และเพิ่มจำนวนในกุ้งเป็นครั้งแรก ผลพบ positive in situhybridization ของไวรัส IHHN ในกุ้งที่ติดเชื้อชนิดนี้ทั้งใน nucleolus และใน cytoplasm
URI: http://ir.sc.mahidol.ac.th/handle/123456789/485
ISSN: 2229-063X
Appears in Collections:Anatomy: National Journal Publications

Files in This Item:
There are no files associated with this item.


Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.