Please use this identifier to cite or link to this item: https://ir.sc.mahidol.ac.th/handle/123456789/378
Title: Functional Analysis of Recombinant Cathepsin B Proteases, a Vaccine Candidate against Fasciola gigantica
Other Titles: การคุณลักษณะการเป็นเอ็นไซม์ของโปรตีนคาเทบซินบี สังเคราะห์ เพื่อ การพัฒนาวัคซีนต่อโรคพยาธิใบไม้ตับ
Authors: Krai Meemon
Prasert Sobhon
Keywords: cathepsin B;Fasciola gigantica;liver fluke
Issue Date: 2009
Publisher: 32 nd AAT Annual Conference Abstract : ประชุมวิชาการกายวิภาคศาสตร์แห่งประเทศไทย ครั้งที่ 32
Citation: ประชุมวิชาการกายวิภาคศาสตร์แห่งประเทศไทย ครั้งที่ 32
Abstract: The aims of this study are to analyze the functions of recombinant cathepsin B that could potentially be developed as vaccine against Fasciola gigantica. Cathepsin B proteases (FgCatB2 and FgCatB3) were expressed predominantly by metacercariae and newly excysted juvenile (NEJs) of this parasite. Recombinant F. gigantica cathepsin B proteases were expressed in the Pichia pastoris system and purified using Ni-NTA resin.Purified recombinant cathepsin B proteases were shown to be enzymatically active since they were able to undergo autoprocessing. The recombinant enzyme (rFgCatB3) was able to digest Z-Phe-Arg-AMC at pH 4.5 in the presence of DTT and dextran sulfate (500K). Zymography of recombinant cathepsin B proteases showed clear area of protease activity. The putative function of rFgCatB3 was shown by its ability to cleave fibronectin which suggested that this enzyme may be involved in digesting host connective tissues during penetration and migration on the host. The recombinant FgCatB3 was antigenic in mice and it elicited a high level of IgG1 antibody response. The antibodies to the protein were detected early after infection of mice and rats with F. gigantiga metacercariae. The kinetics of the response to cathepsin B after infection of mice and rats confirmed the temporal expression of these proteins during the life cycle of the parasite. In addition, rFgCatB3/FA vaccine in mice conferred 41.8% protection against F. gigantica infection.
Other Abstract: วัตถุประสงค์ของการศึกษาครั้งนี้คือ เพื่อศึกษาคุณลักษณะและหน้าที่ของโปรตีนคาเทบซิน บี ซึ่งเป็นโปรตีนที่มีคุณสมบัติ ในการพัฒนาเป็นวัคซีนต่อโรคพยาธิใบไม้ตับ โปรตีนคาเทบซิน บี เป็นโปรตีนหลักที่มีมากที่สุดในพยาธิใบไม้ตับระยะเมตาเซอร์คาเรียและระยะแรกเริ่ม ในการศึกษาครั้งนี้ใช้โปรตีนคาเทบซิน บี ที่สังเคราะห์ขึ้นในยีสต์ P. pastoris เมื่อผ่านการทำให้บริสุทธิ์โปรตีนคาเทบซิน บี สามารถแสดงคุณลักษณะการเป็นเอ็นไซม์ โดยสามารถย่อยเจลาตินเจลและย่อยสับสเตรทเรืองแสงสังเคราะห์ นอกจากนี้โปรตีนคาเทบซิน บี ยังสามารถย่อยไฟโบรเนกติน (fibronectin) ซึ่งเป็นส่วนประกอบหลักของเนื้อเยื่อเกี่ยวพันของโฮสต์ ดังนั้นอาจกล่าวได้ว่าโปรตีนคาเทบซิน บี มีส่วนช่วยพยาธิใบไม้ตับชอนไชเนื้อเยื่อของโฮสต์ไปสู่ตับโปรตีนคาเทบซิน บี ถูกตรวจพบได้ในซีรั่มของหนูแรทและหนูเมาส์ที่ติดเชื้อพยาธิใบไม้ตับ ซึ่งเป็นการบ่งชี้ว่าพยาธิใบไม้ ตับหลั่งโปรตีนคาเทบซิน บี ในโฮสต์ การฉีดกระตุ้นหนูเมาส์ด้วยโปรตีนคาเทบซิน บี3 สังเคราะห์ร่วมกับ Freund’s adjuvant ผ่านทางช่องท้อง พบว่าโปรตีนคาเทบซิน บี3 สามารถกระตุ้นให้เกิดการตอบสนองแบบ humoral ได้ โดยพบว่าหนูเมาส์มีระดับของ IgG1 ในกระแสเลือดสูงขึ้นและผลการทดสอบวัคซีนเบื้องต้น พบว่าโปรตีนคาเทบซิน บี3 สามารถป้องกันหนูเมาส์จากการติดเชื้อพยาธิใบไม้ตับได้ร้อยละ 41.8
URI: http://ir.sc.mahidol.ac.th/handle/123456789/378
Appears in Collections:Anatomy: International Proceedings

Files in This Item:
There are no files associated with this item.


Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.